摘要:目的 建立4300紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)撿剝血中碳氧血紅蛋白含量方
法快速診斷一氧化碳(CO)中毒,方法檢血用0 1%Na2CO3稀釋.加入連二亞硫酸鈉.4300紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定500 nm~600nm吸收光譜和538nm和555nm處吸光度值,確定碳氧血紅蛋白,計(jì)算碳氧血紅蛋白含量。
結(jié)果 氧和血紅蛋白的zui大吸收波長(zhǎng)為555 nm,碳氧血紅蛋白的zui大吸收波長(zhǎng)為538 nm和555 nm。4300紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)檢測(cè)血中碳氧血紅蛋白含量(10%~90%)回收率平均為95%一l10%.標(biāo)準(zhǔn)差為2.1%-8. 0%,zui低檢出農(nóng)度為2%:
80例可疑CO中毒者中63例血中檢出碳氧血紅蛋白,平均含量為35%。
168倒可疑CO中毒死亡者中124例血中檢出碳氧血紅蛋白。
結(jié)論4300紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)檢測(cè)血中碳氧血紅蛋白,具有快速、準(zhǔn)確、操作簡(jiǎn)便、結(jié)果可靠的特點(diǎn),可應(yīng)用于CO中毒的診斷和CO中毒死亡的法醫(yī)學(xué)鑒定。
關(guān)鍵詞:一氧化碳中毒;碳氧血紅蛋白;4300紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)
1資料與方法
1.1藥品和試劑:連二亞硫酸鈉、肝索鈉均為國(guó)產(chǎn)分析純。
1.2主要儀器:4300紫外可見(jiàn)分光光度計(jì),掃描渡長(zhǎng)范圍(200--700)nm。
1.3標(biāo)本采集:可疑CO中毒病人,肘靜脈采血(5~10)mL,加入肝素化試管中,試管上部不留空問(wèn),密封,立即送檢。
1.4碳氧血紅蛋白定性定量檢驗(yàn):檢血40uL,加入1 0mL0 1%Na2CO3溶液,4300紫外分光光度計(jì)測(cè)定(500--600)nm吸收光譜及538nm和555nm處吸光度值(和A555)。根據(jù)吸收光譜形狀和zui大吸收波長(zhǎng)確定有無(wú)碳氧血紅蛋白,按公式COHb%=A538÷A555÷0 458 -1.692計(jì)算血中碳氧血紅蛋白含量。
2結(jié)果
2.1 碳氧血紅蛋白光譜掃描圖
取新鮮肝素鈉抗凝人血100mL_通人CO飽和(2-3)h,充分飽和,使碳氧血紅蛋白含量達(dá)100%。配制不同碳氧血紅蛋白含量的系列血液樣品,按上述方法操作和扣描,得到不同碳氧血紅蛋白含量血液的光譜掃描。
2.2 血中碳氧血紅蛋白含量檢測(cè)回收率
用空白血和CO充分飽和血(碳氧血紅蛋白含量為100%)配制不同碳氧血紅蛋白含量(10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%)的系列血液樣品,每個(gè)濃度血樣按前述方法取5份檢測(cè)氧血紅蛋白含量。詳見(jiàn)表1
2.3 中毒病人檢測(cè)
選擇2005年1月1日-2005年12月30日山西醫(yī)科大學(xué)*醫(yī)院急診科、山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院急診科、山西省人民醫(yī)院急診科所送可疑CO中毒病人80例,其血中碳氧血紅蛋白含量檢測(cè)結(jié)果。共檢驗(yàn)80例,槍出COHb者63例,未榆出COHb者17例,COHb含量35%,檢出含量25%~65%。
2 4 CO中毒死亡者檢測(cè)
2005年1月1日-2005年12月30日山西省范圍內(nèi)部分可疑CO中毒死亡案例檢測(cè)結(jié)果。共檢驗(yàn)168例,未檢出COHb者44例(26.2%),檢出COHb者124例(73.8%),COHb含量9.0%-70.6%,其中<10%例(0.08%),10%~20%6例(4.80%),20%~30%8例(6.45%),30%~40%i例(0.08%).40%~50%9例(7.25%),(50%~60%),51例(41 1%),61%~70%35例(28 20%),>70%13例(10.50%)。
3討論
3.1血中碳氧血紅蛋白檢測(cè)
建立血中碳氧血紅蛋白的4300紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)檢測(cè)方法,光譜掃描和吸光度值可同時(shí)進(jìn)行,整個(gè)檢驗(yàn)可在10 min內(nèi)完成。與化學(xué)法和氯化鈀試驗(yàn)法相比,具有操作簡(jiǎn)便、耗時(shí)短、成本低等優(yōu)點(diǎn),檢測(cè)靈敏度、回收率均達(dá)到生物檢驗(yàn)內(nèi)毒物檢測(cè)的要求,可應(yīng)用于CO中毒的診斷和CO中毒的法醫(yī)學(xué)鑒定。
3.2中毒病人檢測(cè)
臨床CO中毒癥狀和體征比較明顯,病史結(jié)臺(tái)臨床癥狀診斷準(zhǔn)確度較高。本研究巾臨床診斷80例可疑cO中毒病人55例血中檢出COHb。但中毒程度的判定,尤其懷疑合并用藥或病史不清伴有昏迷時(shí)COHb定量檢測(cè)很有必要。所檢血中COHb含量zui高的昏迷病人血中COHb達(dá)65%,10 mm內(nèi)檢驗(yàn)完畢,依照檢驗(yàn)結(jié)果很快進(jìn)釘高壓氧艙治療,24 h后病人意識(shí)恢復(fù),各種生命體征恢復(fù)正常。
3.3 CO中毒死亡案例檢測(cè)
一般認(rèn)為,CO中毒死亡者血中碳氧血紅蛋白含量多達(dá)60%~80%。2005年山西省部分CO中毒死亡案例死者血中COHb檢出情況顯示,26.2%中未檢出COHb,73..8%檢出COHb。后者(124例)中COHb含量大于60%者占38.72%,50%~60%者占4l.1%,40%~50%者占7.25%,小于40%者占12 9%,而在大于50%的99例血中均未檢出其他毒物,故認(rèn)為血中碳氧血紅蛋白含量大于50%,排除其他毒物即可診斷為CO中毒死亡。