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維生素C是一種水溶性維生素，是人體必需營養(yǎng)素，嚴(yán)重缺乏會(huì)導(dǎo)致壞血病，因此它又被稱為抗壞血酸。人體無法對維生素C進(jìn)行合成，只能通過食物攝取。嬰幼兒配方奶粉中的維生素對嬰幼兒的健康成長尤為重要，尤其對無法進(jìn)行母乳喂養(yǎng)、將配方奶粉作為主要營養(yǎng)來源的嬰兒而言。

本文對乳粉中維生素C的液相色譜法進(jìn)行研究，對樣品的提取溶液進(jìn)行比較篩選，對去除蛋白、脂肪的凈化分離條件進(jìn)行優(yōu)化，從而建立簡便、有效可行的分析方法，適用于日常乳粉中維生素C的檢測，同時(shí)本文對pH值影響維生素C溶液穩(wěn)定性進(jìn)行深入探討。

1材料與方法

1．1材料與試劑

抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)品(純度大于99%)Sigma公司;二硫蘇糖醇(純度大于99%)Sigma公司;甲醇(色譜純) ;正己烷、磷酸二氫鉀、偏磷酸、乙酸(分析純);超純水(由Mill－Q純水器系統(tǒng)制得)。

1．2儀器與設(shè)備

液相色譜儀(配有島津LC20AD泵，SIL20AC自動(dòng)進(jìn)樣器，SPDM20A二 極 管 陣 列 檢 測 器、LCsolution色 譜 工 作站) ;超聲波水浴;高速冷凍離心機(jī)(德國Sigma公司) ;渦旋振蕩器(德國Heidolph公司) ;水平往復(fù)振蕩器(德國IKA公司)。

1．3標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制

精 密 稱 取50mg(精 確 到0．1mg)抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)品于100ml容量瓶中，以3%偏磷酸水溶液定容至刻度，配成標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液濃度為500mg/L。置于4°C冰箱避光保存，保存期1個(gè)月。臨用前用3%偏磷酸水溶液將標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液逐級稀釋得到的 濃 度 為0．5mg/L、1．0mg/L、2．0mg/L、5．0mg/L、10mg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1．4色譜條件

色譜柱:AgilentTC－C18色譜柱，(250×4．6mm，5μm) ;流 動(dòng) 相:0．05mol/L磷 酸 二 氫 鉀(pH=2．5) ;流 速:1．0ml/min;柱溫:35°C;進(jìn)樣量:10μl;檢測波長:240nm。

1．5樣品處理

稱取1．0g試樣于50ml具塞塑料離心管中，加入1．0ml20mg/ml二硫蘇糖醇，置暗處反應(yīng)半小時(shí)，取出加入3%偏磷酸水溶液溶解并定容至10ml，渦旋混勻1min，置水平往復(fù)振蕩器上振蕩或超聲波水浴中超聲提取10min，取出，加入5ml正己烷渦旋混勻30s，以不低于4000r/min離心5min，下層水相過0．45μm水相濾膜后，供液相色譜測定。

2結(jié)果與討論

2．1標(biāo)準(zhǔn)溶液穩(wěn)定性

維生素C的標(biāo)準(zhǔn)工作液(10mg/L)在pH＜2的偏磷酸溶液和pH=2的1%乙酸溶液中6h之 內(nèi) 穩(wěn) 定，幾 乎 不 降 解，24h后測定分別降低8%和26%，;在pH=3水 溶 液 中6h降 解32%，24h后 測 定 降 解94%;pH=4和pH=6溶液中2h分別降解52%和58%，24h后測定均降解100%。

2．2提取溶液的選擇

本方法選擇3%偏磷酸溶液作為提取溶劑。

2．3色譜條件的優(yōu)化

采用AgilentTC－C18分析維生素C標(biāo)準(zhǔn)品的液相色譜圖見圖1。

用不含維生素C的乳粉樣品進(jìn)行添加回收和精密度實(shí)驗(yàn)，樣品空白和樣品添加的色譜圖見圖2～圖3，乳粉中添加維生素C的回收率和精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

嬰幼兒乳粉測定維生素C的測定結(jié)果如表2.