1儀器與材料
液相色譜儀，含SPD—M20A二極管陣列檢測器，CBM—20A系統(tǒng)控制器，CTO—20A柱溫箱；梅特勒EL—204十萬分之一分析天平；自動雙重蒸餾水蒸餾器；數(shù)控超聲儀；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；C—605中壓制備色譜儀。
蘆丁、異鼠李素-3-O-蕓香糖苷、江戶櫻花苷、槲皮素、山柰酚對照品均由本實驗室分離得到，經(jīng)MS、1H-NMR和13C-NMR確定結(jié)構(gòu)，HPLC峰面積歸一化法分析質(zhì)量分數(shù)均達到98%以上。珍珠菜藥材（批號分別為200801、200802、200803。乙腈為色譜純，水為二次蒸餾水，其余試劑為分析純；色譜硅膠。
2方法與結(jié)果
2.1珍珠菜提取物的制備
取珍珠菜干燥藥材，用10倍量80%乙醇提取3次，合并提取液，加水沉淀除去弱極性物質(zhì)，上清液濃縮至無醇味，濾過，濾液上AB-8大孔樹脂，上樣后先用水洗脫至無色，再依次用40%、95%乙醇洗脫，將40%乙醇洗脫部位濃縮、冷凍干燥成粉末，即得珍珠菜提取物。
2.2色譜條件
色譜柱為Chromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5.0 μm）；流動相為乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脫：0～20 min，13%～35% A；20～30 min，35%～100% A；體積流量1.0 mL/min；雙波長檢測λ1＝283 nm（江戶櫻花苷），λ2＝370 nm（蘆丁、異鼠李素-3-O-蕓香糖苷、槲皮素、山柰酚）；柱溫35 °C。色譜圖見圖1。
2.3對照品儲備液的制備
精密稱取各對照品適量，用甲醇溶解并定容，分別得到含蘆丁381.0 μg/mL、異鼠李素-3-O-蕓香糖苷166.0 μg/mL、江戶櫻花苷387.0 μg/mL、槲皮素55.2 μg/mL、山柰酚25.2 μg/mL的對照品儲備液。
2.4供試品溶液的制備
精密稱取珍珠菜提取物樣品25.0 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，過0.45 μm膜，即得供試品溶液。
2.5線性關(guān)系考察
分別精密量取蘆丁、異鼠李素-3-O-蕓香糖苷、江戶櫻花苷和山柰酚對照品儲備液各15.0、12.0、9.0、6.0、3.0 mL及槲皮素對照品儲備液10.0、8.0、6.0、4.0、2.0 mL，分別置100 mL量瓶中，甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，配制成一系列質(zhì)量濃度的混合對照品溶液，精密吸取各混合對照品溶液20 μL，分別注入液相色譜儀，測定，以進樣量為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程（表1），各對照品與峰面積線性關(guān)系良好。
2.6檢測限
取上述對照品儲備液，定量稀釋成不同質(zhì)量濃度對照品溶液后，直接進樣，直到某一進樣量出峰峰高為儀器噪音的3倍時，即為該對照品的檢測限，結(jié)果見表1。
2.7精密度試驗
吸取上述5種混合對照品溶液20 μL，重復進樣6次，計算峰面積的RSD，即為日內(nèi)精密度；連續(xù)檢測3 d，每天檢測2次，計算峰面積的RSD，即為日間精密度，結(jié)果見表1。
2.10回收率試驗
精密稱取9份批號為200801的珍珠菜提取物樣品，每份約4.0 mg，分別置5.0 mL量瓶中，平均分成3組，按照樣品中每種待測成分量的80%、100%、120%定量加入5種對照品，甲醇定容，分別取20 μL進樣分析，外標法計算各成分平均回收率。結(jié)果蘆丁、異鼠李素-3-O-蕓香糖苷、江戶櫻花苷、槲皮素、山柰酚的平均回收率分別為97.8%、98.9%、102.4%、98.4%、92.2%，RSD分別為2.70%、1.71%、1.16%、0.50%、3.81%。
2.11樣品測定
取3個批次的珍珠菜提取物樣品，制備供試品溶液，分別進樣20 μL，測定，外標法計算，結(jié)果見表2。
3討論
實驗結(jié)果表明不同批次珍珠菜提取物樣品間所測化學成分的量相差不大。黃酮類化合物既是珍珠菜提取物中的主要成分，又是主要的抗腫瘤活性成分，通過測定發(fā)現(xiàn)蘆丁、江戶櫻花苷等黃酮苷的量較高，而槲皮素、山柰酚等苷元的量較低，故可用蘆丁、江戶櫻花苷為指標來控制提取物中黃酮類和二氫黃酮類的量。本方法操作簡便快捷，結(jié)果準確可靠，重復性好，靈敏度高，可用于珍珠菜提取物中黃酮類化合物的質(zhì)量控制。
在線咨詢